ווי צו באַשטימען די אָפּטימאַלע קאַנסאַנטריישאַן?
פֿאַר דעם אינדוצירער IPTG (איזאָפּראָפּיל-בעטאַ-ד-טהיאָגאַלאַקטאָסיד), וואָס העכער די קאָנצענטראַציע, אַלץ בעסער. די אָפּטימאַלע קאָנצענטראַציע דעפּענדס אויף די ספּעציפֿישע עקספּערימענטאַלע באַדינגונגען און דעם געוואונטשענעם אינדוקציע-עפֿעקט.
בכלל, די קאנצענטראציע פון IPTG ווערט גענוצט אין די קייט פון 0.1-1 mM. נידעריקערע קאנצענטראציעס קענען רעדוצירן נעגאטיווע עפעקטן אויף צעל וואוקס און קענען רעדוצירן ציטאטאקסיסיטי רעכט צו איבער-אויסדרוק פון ציל פראטעאינען. העכערע קאנצענטראציעס קענען פאראורזאכן איבערגעטריבענע צעל מעטאבאלישע לאסט, וואס באאיינפלוסט צעל וואוקס און אויסדרוק עפעקטיווקייט.
דער וועג צו באַשטימען די אָפּטימאַלע קאָנצענטראַציע קען זיין צו אָפּשאַצן דעם אויסדרוק לעוועל פון דעם ציל פּראָטעין דורך דורכפירן IPTG אינדוקציע טעסץ ביי פאַרשידענע קאָנצענטראַציעס. קליין-וואָג קולטור טעסץ קענען דורכגעפירט ווערן מיט אַ קייט פון IPTG קאָנצענטראַציעס (למשל 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, אאז"וו) און דער אויסדרוק ווירקונג ביי פאַרשידענע קאָנצענטראַציעס קען עוואַלויִרט ווערן דורך דעטעקטירן דעם אויסדרוק לעוועל פון דעם ציל פּראָטעין (למשל וועסטערן בלאָט אָדער פלואָרעססענס דעטעקציע). לויט די עקספּערימענטאַלע רעזולטאַטן, איז די קאָנצענטראַציע מיט דעם בעסטן אויסדרוק ווירקונג אויסגעקליבן געוואָרן ווי די אָפּטימאַלע קאָנצענטראַציע.
דערצו, קענט איר אויך זיך ווענדן צו די באטרעפנדע ליטעראַטור אדער די דערפאַרונג פון אַנדערע לאַבאָראַטאָריעס צו פֿאַרשטיין די אָפט גענוצטע IPTG קאָנצענטראַציע קייט אונטער ענלעכע עקספּערימענטאַלע באַדינגונגען, און דערנאָך אָפּטימיזירן און אַדזשאַסטירן לויט די עקספּערימענטאַלע באַדערפענישן.
עס איז וויכטיג צו באַמערקן אַז די אָפּטימאַלע קאָנצענטראַציע קען ווערירן דיפּענדינג אויף פאַרשידענע אויסדרוק סיסטעמען, ציל פּראָטעאינען און עקספּערימענטאַלע באדינגונגען, אַזוי עס איז בעסטער צו אָפּטימיזירן אויף אַ פאַל-צו-פאַל יקער.
פּאָסט צייט: סעפּטעמבער 28, 2023