דיטיאָטהרייטאָל (DTT) איז אַ אָפט געניצטער רעדוצירנדיקער אַגענט, אויך באַקאַנט ווי דער נייַער גרינער אַדיטיוו. עס איז אַ קליין מאָלעקולאַר אָרגאַנישער קאַמפּאַונד מיט צוויי מערקאַפּטאַן גרופּעס (-SH). צוליב זייַנע רעדוצירנדיקע אייגנשאַפטן און פעסטקייט, ווערט DTT ברייט געניצט אין ביאָכעמיע און מאָלעקולאַרע ביאָלאָגיע עקספּערימענטן.
די הויפּט ראָלע פֿון DTT איז צו רעדוצירן דיסולפֿיד בינדונגען אין פּראָטעאינען און אַנדערע ביאָמאָלעקולן. די דיסולפֿיד בינדונג איז אַ וויכטיקער טייל פֿון פּראָטעין פֿאָלדינג און סטאַביליטעט, אָבער אונטער געוויסע עקספּערימענטאַלע באַדינגונגען, ווי למשל רעדוצירבאַרע SDS-PAGE אַנאַליז, פּראָטעין רעקאָמבינאַציע און פֿאָלדינג, איז עס נייטיק צו רעדוצירן די דיסולפֿיד בינדונג צו צוויי טיאָל גרופּעס כּדי צו אַנטפּלעקן די ספּיישאַל סטרוקטור פֿון דעם פּראָטעין. DTT קען רעאַגירן מיט דיסולפֿיד בינדונגען כּדי זיי צו רעדוצירן צו מערקאַפּטאַן גרופּעס, אַזוי עפֿענענדיק די ספּיישאַל סטרוקטור פֿון דעם פּראָטעין און מאַכנדיג עס גרינג צו אַנאַליזירן און מאַניפּולירן.
DTT קען אויך גענוצט ווערן צו באשיצן ענזיים טעטיקייט און סטאביליטעט. אין געוויסע ענזיים-קאטאליזירטע רעאקציעס, קען די טעטיקייט פון דעם ענזיים פארקלענערט ווערן דורך דעם אקסידאנט. DTT קען רעאגירן מיט אקסידאנטן צו רעדוצירן זיי צו אומשעדלעכע סובסטאנצן, דערמיט באשיצנדיק די טעטיקייט און סטאביליטעט פון דעם ענזיים.
קאַמפּערד צו טראַדיציאָנעלע רעדוצירנדיקע אגענטן ווי β-מערקאַפּטאָעטאַנאָל (β-ME), ווערט DTT באַטראַכט ווי אַ זיכערער און מער סטאַבילער רעדוצירנדיקער אגענט. עס איז נישט נאָר סטאַביל אין וואַסעריקער לייזונג, נאָר אויך האַלט עס זייַנע רעדוצירנדיקע אייגנשאַפטן אונטער הויכע טעמפּעראַטור און זויער-באַזע באַדינגונגען.
די נוצן פון DTT איז רעלאטיוו פשוט. בכלל, ווערט DTT אויפגעלייזט אין א פאסיגע באַפער און דערנאך צוגעגעבן צום עקספּערימענטאַלן סיסטעם. די אָפּטימאַלע קאָנצענטראַציע פון DTT דאַרף באַשטימט ווערן לויטן ספּעציפֿישן עקספּערימענט, און ווערט בכלל גענוצט אין דעם קייט פון 0.1-1mM. נידעריקערע קאָנצענטראַציעס קענען רעדוצירן נעגאַטיווע ווירקונגען אויף צעל וווּקס און קענען רעדוצירן ציטאָטאָקסיסיטי רעכט צו איבער-אויסדרוק פון ציל פּראָטעאינען. העכערע קאָנצענטראַציעס קענען פאַרשאַפן איבערגעטריבענע צעל מעטאַבאַלישע לאַסט, וואָס אַפעקטירט צעל וווּקס און אויסדרוק עפעקטיווקייט.
דער וועג צו באַשטימען די אָפּטימאַלע קאָנצענטראַציע קען זיין צו אָפּשאַצן דעם אויסדרוק לעוועל פון דעם ציל פּראָטעין דורך דורכפירן IPTG אינדוקציע טעסץ ביי פאַרשידענע קאָנצענטראַציעס. קליין-וואָג קולטור טעסץ קענען דורכגעפירט ווערן מיט אַ קייט פון IPTG קאָנצענטראַציעס (למשל 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, אאז"וו) און דער אויסדרוק ווירקונג ביי פאַרשידענע קאָנצענטראַציעס קען עוואַלויִרט ווערן דורך דעטעקטירן דעם אויסדרוק לעוועל פון דעם ציל פּראָטעין (למשל וועסטערן בלאָט אָדער פלואָרעססענס דעטעקציע). לויט די עקספּערימענטאַלע רעזולטאַטן, איז די קאָנצענטראַציע מיט דעם בעסטן אויסדרוק ווירקונג אויסגעקליבן געוואָרן ווי די אָפּטימאַלע קאָנצענטראַציע.
דערצו, קענט איר אויך זיך ווענדן צו די באטרעפנדע ליטעראַטור אדער די דערפאַרונג פון אַנדערע לאַבאָראַטאָריעס צו פֿאַרשטיין די אָפט גענוצטע IPTG קאָנצענטראַציע קייט אונטער ענלעכע עקספּערימענטאַלע באַדינגונגען, און דערנאָך אָפּטימיזירן און אַדזשאַסטירן לויט די עקספּערימענטאַלע באַדערפענישן.
עס איז וויכטיג צו באַמערקן אַז די אָפּטימאַלע קאָנצענטראַציע קען ווערירן דיפּענדינג אויף פאַרשידענע אויסדרוק סיסטעמען, ציל פּראָטעאינען און עקספּערימענטאַלע באדינגונגען, אַזוי עס איז בעסטער צו אָפּטימיזירן אויף אַ פאַל-צו-פאַל יקער.
אין קורצן, DTT איז א געווענליך גענוצטער רעדוצירער אגענט וואס קען גענוצט ווערן צו רעדוצירן דיסולפיד בינדונגען אין פראטעאינען און אנדערע ביאמאלעקולן און צו באשיצן ענזיים טעטיקייט און סטאביליטעט. עס איז ברייט גענוצט געווארן אין ביאכעמיע און מאלעקולארע ביאלאגיע עקספערימענטן.
פּאָסט צייט: סעפּטעמבער 28, 2023