דיטהיאָטהרעיטאָל (דטט) איז אַ קאַמאַנלי געניצט רידוסינג אַגענט, אויך באקאנט ווי די נייַ גרין אַדאַטיוו.עס איז אַ קליין מאָלעקולאַר אָרגאַניק קאַמפּאַונד מיט צוויי מערקאַפּטאַן גרופּעס (-ש).רעכט צו זיין רידוסינג פּראָפּערטיעס און פעסטקייַט, DTT איז וויידלי געניצט אין בייאָוקעמאַסטרי און מאָלעקולאַר ביאָלאָגי יקספּעראַמאַנץ.
די הויפּט ראָלע פון DTT איז צו רעדוצירן דיסולפידע קייטן אין פּראָטעינס און אנדערע בייאָומאָלעקולעס.די דיסולפידע בונד איז אַ וויכטיק טייל פון פּראָטעין פאָלדינג און פעסטקייַט, אָבער אונטער זיכער יקספּערמענאַל טנאָים, אַזאַ ווי רעדוסיבלע SDS-PAGE אַנאַליסיס, פּראָטעין רעקאָמבינאַטיאָן און פאָלדינג, עס איז נייטיק צו רעדוצירן די דיסולפידע בונד צו צוויי טיאָל גרופּעס צו אַנראַוואַל די ספּיישאַל סטרוקטור פון דער פּראָטעין.DTT קענען רעאַגירן מיט דיסולפידע קייטן צו רעדוצירן זיי צו מערקאַפּטאַן גרופּעס, אַזוי עפן די ספּיישאַל סטרוקטור פון די פּראָטעין און מאַכן עס גרינג צו אַנאַלייז און מאַניפּולירן.
דטט קענען אויך זיין געניצט צו באַשיצן ענזיים טעטיקייט און פעסטקייַט.אין עטלעכע ענזיים-קאַטאַלייזד ריאַקשאַנז, די טעטיקייט פון די ענזיים קען זיין רידוסט דורך די אַקסאַדאַנט.DTT קענען רעאַגירן מיט אָקסידאַנץ צו רעדוצירן זיי צו ומשעדלעך סאַבסטאַנסיז, דערמיט פּראַטעקטינג די טעטיקייט און פעסטקייַט פון די ענזיים.
קאַמפּערד מיט טראדיציאנעלן רידוסינג אגענטן אַזאַ ווי β-מערקאַפּטאָעטאַנאָל (β-ME), DTT איז גערעכנט ווי אַ סאַפער און מער סטאַביל רידוסינג אַגענט.עס איז ניט בלויז סטאַביל אין ייקוויאַס לייזונג, אָבער אויך מיינטיינז זייַן רידוסינג פּראָפּערטיעס אונטער הויך טעמפּעראַטור און זויער-באַזע טנאָים.
די נוצן פון DTT איז לעפיערעך פּשוט.אין אַלגעמיין, DTT איז צעלאָזן אין אַ צונעמען באַפער און דערנאָך צוגעגעבן צו די יקספּערמענאַל סיסטעם.די אָפּטימאַל קאַנסאַנטריישאַן פון DTT דאַרף זיין באשלאסן לויט די ספּעציפיש עקספּערימענט, און איז בכלל געניצט אין די קייט פון 0.1-1מם.נידעריקער קאַנסאַנטריישאַנז קענען רעדוצירן אַדווערס יפעקץ אויף צעל גראָוט און קענען רעדוצירן סיטאָטאָקסיסיטי רעכט צו אָוווערעקספּרעססיאָן פון ציל פּראָטעינס.העכער קאַנסאַנטריישאַנז קען פאַרשאַפן יבעריק צעל מעטאַבאַליק מאַסע, אַפעקטינג צעל גראָוט און אויסדרוק עפעקטיווקייַט.
דער וועג צו באַשטימען די אָפּטימאַל קאַנסאַנטריישאַן קענען זיין צו אָפּשאַצן די אויסדרוק מדרגה פון די ציל פּראָטעין דורך קאַנדאַקטינג IPTG ינדאַקשאַן טעסץ אין פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַנז.קליין-וואָג קולטור טעסץ קענען זיין דורכגעקאָכט מיט אַ קייט פון IPTG קאַנסאַנטריישאַנז (למשל 0.1 מם, 0.5 מם, 1 מם, אאז"ו ו) און די אויסדרוק ווירקונג אין פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַנז קענען זיין עוואַלואַטעד דורך דיטעקטינג די אויסדרוק מדרגה פון די ציל פּראָטעין (למשל מערב) בלאָט אָדער פלורעסאַנס דיטעקשאַן).לויט די יקספּערמענאַל רעזולטאַטן, די קאַנסאַנטריישאַן מיט דער בעסטער אויסדרוק ווירקונג איז אויסגעקליבן ווי די אָפּטימאַל קאַנסאַנטריישאַן.
אין אַדישאַן, איר קענט אויך אָפּשיקן צו די באַטייַטיק ליטעראַטור אָדער דערפאַרונג פון אנדערע לאַבאָראַטאָריעס צו פֿאַרשטיין די אָפט געניצט IPTG קאַנסאַנטריישאַן קייט אונטער ענלעך יקספּערמענאַל טנאָים, און דערנאָך אַפּטאַמייז און סטרויערן לויט די יקספּערמענאַל באדערפענישן.
עס איז וויכטיק צו טאָן אַז די אָפּטימאַל קאַנסאַנטריישאַן קען בייַטן דיפּענדינג אויף פאַרשידענע אויסדרוק סיסטעמען, ציל פּראָטעינס און יקספּערמענאַל טנאָים, אַזוי עס איז בעסטער צו אַפּטאַמייז אויף אַ פאַל-ביי-פאַל יקער.
אין קיצער, DTT איז אַ קאַמאַנלי געניצט רידוסינג אַגענט וואָס קענען זיין גענוצט צו רעדוצירן דיסולפידע קייטן אין פּראָטעינס און אנדערע בייאָומאָלעקולעס און צו באַשיצן ענזיים טעטיקייט און פעסטקייַט.עס איז וויידלי געניצט אין בייאָוקעמאַסטרי און מאָלעקולאַר ביאָלאָגי יקספּעראַמאַנץ.
פּאָסטן צייט: 28-2023 סעפטעמבער